Para Guardians memilih untuk menetap di Knowhere bersama penduduk dari berbagai planet usai peristiwa Avengers: Endgame (2019). Mereka banyak menghabiskan waktu untuk menjaga Knowhere sambil sesekali pergi untuk menjalankan misi penyelamatan di planet lain.
Di samping itu, Peter Quill alias Star-Lord (Chris Pratt) masih bergulat dengan hatinya karena Gamora (Zoe Saldana) ternyata masih hidup. Namun, situasi itu justru membuat Star-Lord galau karena sang kekasih sama sekali tidak memiliki memori tentang dirinya.
Sebab, Gamora yang masih hidup itu datang dari era sebelum Geng Guardians terbentuk. Hal itu membuat Star-Lord banyak meratapi nasib, termasuk menjadi sering mabuk sampai tak sadarkan diri.
Suatu hari, Knowhere diserang oleh makhluk misterius yang belakangan diketahui bernama Adam Warlock (Will Poulter). Ia merupakan makhluk super yang diciptakan Sovereign untuk menyerang para Guardians. Warlock yang baru diciptakan itu langsung mendapat tugas untuk menculik Rocket (Bradley Cooper). Namun, karena minim pengalaman membuat misi itu tidak berjalan mulus.
Adam Warlock gagal membawa Rocket dan justru membuat makhluk jenius itu terluka parah hingga nyaris tewas. Ia kemudian kembali untuk melapor kepada Ayesha (Elizabeth Debicki), pemimpin bangsa Sovereign, serta High Evolutionary (Chukwudi Iwuji).
Ternyata Rocket memiliki fisiologi khusus yang tidak bisa disembuhkan dengan cara yang biasa. Hal ini menyebabkan Peter dan kawan-kawan harus bahu-membahu untuk berhadapan dengan High Evolutionary.
