Sinopsis Bangsal 13 menceritakan dua sahabat, yaitu Mina (Luna Maya) dan Natasha (Edhita) yang tak sengaja menabrak perempuan bernama Hera. Ketiganya lalu bergegas ke rumah sakit terdekat untuk mendapatkan perawatan medis.
Sayangnya, rumah sakit yang mereka datangi penuh, sementara kondisi mereka harus segera mendapat pertolongan. Melihat kejadian tersebut, para suster pun memutuskan membuka kembali bangsal nomor 13 yang tidak pernah dibuka selama 2 tahun.
Natasha, Hera, dan Mina lalu mendapat perawatan. Namun, teror justru baru dimulai, Natasha mendengar suara ketukan yang berasal dari pintu kecil di lantai. Saat mencoba mendekati arah suara, ia justru dikagetkan dengan kemunculan Suster Frida (Lia Candrasari).
Perawat itu mengingatkan, agar Natasha tak membuka atau masuk ke dalam pintu tersebut. Tak menghiraukan ucapan Suster Frida, Natasha pun memberanikan diri membuka pintu di ujung bangsal 13 tersebut, tetapi dia tak menemukan apa-apa di dalamnya.
Melihat hal tersebut, Natasha kemudian menelepon kekasihnya, Devon (Ario Bayu). Namun, panggilan telepon itu tak mendapat jawaban.
Natasha akhirnya sembuh setelah dapat perawatan medis di rumah sakit. Tetapi ia tak langsung pulang dan memilih menunggu Mina serta Hera hingga pulih.
Di tempat yang berbeda, Dokter Aziz (Andhika) mendapat teguran dari atasannya karena membuka bangsal nomor 13 untuk perawatan. Pasalnya, tempat itu tidak boleh dibuka sama sekali, meski dalam keadaan darurat.
Kejadian mistis turut menghantui Mina, dia merasa dikejar hingga lari ketakutan. Tiba-tiba Suster Frida muncul dan berkata jika pasiennya itu telah memanggilnya.
Suster Frida akhirnya menceritakan mengenai asal usul dan kutukan dari bangsal nomor 13. Sekitar 20-an tahun lalu, ada seorang suster yang mengidap sakit jiwa di rumah sakit tersebut.
Dia sering mempermainkan nyawa dari pasien-pasien di rumah sakit, serta menyuntikkan racun ke dalam tubuh pasien. Akhirnya suster itu ditangkap, kakinya dirantai, kemudian dimasukkan ke bangsal 13 dan dikunci.
Dalam bangsal itu pula akhirnya suster tersebut tewas secara mengenaskan. Suster Frida juga menyampaikan dengan membuka pintu maka artinya telah memanggil arwah dari suster itu. Arwahnya bisa kembali jika segelnya ditutup. Namun, segelnya tak sengaja dirusak oleh Natasha.